肠道感染病毒
文 / 李晓眠
肠道感染病毒是指主要经消化道传播的病毒。许多病毒可经消化道感染，本章重点介绍小RNA病毒科的肠道病毒属和引起急性胃肠炎的相关病毒。
第一节 小RNA病毒
小RNA病毒科（Picornaviridae）包括4个属，其中肠道病毒属（enterovirus）和鼻病毒属（rhinovirus）与人类疾病最为密切。本节主要介绍肠道病毒属。
肠道病毒属根据宿主范围和致病性分为4个亚组即脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒（ECHO病毒）和新肠道病毒。根据中和试验分为1～72个血清型，其中72型为甲型肝炎病毒，现单列为肝病毒属（hepatovirus）。
肠道病毒是人类消化道的“过客”，可以从人的咽部或下消化道分离到。它们可以引起人类的多种疾病，如麻痹、无菌性脑膜炎、胸肌痛、心肌炎、疹病等，但多见为亚临床感染。
一、脊髓灰质炎病毒
脊髓灰质炎病毒（poliovirus）呈世界性分布。它是引起脊髓灰质炎（poliomyelitis）的病原体。人受脊髓灰质炎病毒感染后大多无症状，常为亚临床感染。只有约0.1%的感染者因病毒侵犯中枢神经系统，破坏脊髓前角运动神经元（motor neuron），导致松弛性肢体麻痹（flaccid paralysis）。本病多见于儿童，故又称小儿麻痹症。世界卫生组织（WHO） 把脊髓灰质炎列入继天花之后第二个被消灭的传染病，目前在大部分地区已经消灭了脊髓灰质炎。
生物学性状
1．病毒结构 病毒呈球形，直径27nm～30nm，核衣壳为二十面体立体对称，无包膜 （图 31-1）。
基因组为单正链RNA，线性，大小约7.44kb，MW 2.5χ106，编码含2200个氨基酸的大分子多聚蛋白，经酶切后形成病毒结构蛋白VP1～VP4和功能性蛋白等（图31-2）。
图31-1 脊髓灰质炎病毒颗粒
负染电镜照片
5’端病毒蛋白VPg以共价键与RNA结合，其作用为病毒RNA的引物，与病毒RNA合成有关；P1区编码VP1、VP2、VP3和VP4，为组成壳粒的蛋白；VP1、VP2和VP3位于壳粒表面，是病毒的中和抗原，VP1还与病毒吸附有关；VP4在衣壳内部与RNA相连接，与病毒基因组脱壳穿入和关闭宿主细胞蛋白合成有关。P2区编码非结构蛋白，与病毒复制和子代正链病毒RNA的合成及组装有关；P3区在转译后可裂解成7种多肽，其功能与病毒复制有关。3’端非编码区的功能与合成负链病毒RNA有关。
图31-2 脊髓灰质炎病毒的基因结构及蛋白合成过程
脊髓灰质炎病毒的复制周期是在细胞质内完成。首先病毒体与细胞膜表面特异性受体结合，触发病毒体构型改变，释放病毒RNA进入胞质，感染性的病毒RNA翻译成多聚蛋白（polyprotein），并快速被蛋白酶裂解成P1、P2、P3片段，其中P2、P3进入细胞内质网，合成子代病毒RNA。P1前体蛋白裂解成结构蛋白，组装成成熟的病毒颗粒，整个周期约需5～10小时（图4-4）。
2．易感动物和细胞培养 脊髓灰质炎病毒感染的宿主范围很窄，人是自然界循环中唯一的宿主。多数毒株可直接接种猴脑或脊髓，猴子则被感染。猩猩和猕猴经口途经也能感染，但感染的猩猩常常无症状，成为病毒的肠道携带者。
多数病毒株能感染来自人组织或猴肾、睾丸或肌肉的原代细胞或传代细胞，引起典型溶细胞型CPE，细胞变圆、坏死及脱落。脊髓灰质炎病毒感染细胞，需要有灵长类动物细胞的特异性膜受体（primate specific membrane receptor），无此受体则不能感染。这种限制性可以通过脂质体（liposome）介导来克服，病毒一旦进入细胞则能正常复制或引入受体基因也能使不敏感细胞变成易感细胞。现已发展了携带灵长类动物受体基因的转基因小鼠，这种小鼠对人脊髓灰质炎病毒易感。
3．抗原性 脊髓灰质炎病毒有3个血清型，即Ⅰ、Ⅱ、 Ⅲ型。应用中和试验可以明确定型，但用补体结合试验或酶联免疫吸附试验3型间则有一定程度的交叉反应。各型病毒含有两种不同的型特异性抗原，即D抗原（或N，天然的）和C抗原（或H，加热的），前者为含有RNA的完整病毒颗粒，后者为不含RNA的空心颗粒。通过加热D型抗原能转变成C型抗原。不同病毒型的C抗原有交叉反应，但D抗原则没有。
4．抵抗力 病毒对理化因素的抵抗力较强，粪便中的病毒在室温条件下，其感染性能维持数周，4℃时能存活数月，-20℃或-70℃时存活数年。在胃肠道能耐受胃酸、蛋白酶、胆汁的作用；在pH3.8～8.5时能存活数周。对热敏感，50℃～55℃很快被灭活，但镁离子及有机物能增强病毒对热的耐受性。病毒对破坏包膜的乙醚和去垢（污）剂不敏感。病毒对紫外线和干燥敏感。在0.3%甲醛、0.1M盐酸以及0.3ppm～0.5ppm余氯环境中很快被灭活。
致病性和免疫性 脊髓灰质炎的传染源为患者和隐性感染者。通过病毒污染的食物、生活用品等可经消化道传播，也有经呼吸道传播的报道。潜伏期一般为7～14天。病毒经口进入胃肠道后，先在口咽部和肠道集合淋巴结中增殖，入血形成病毒血症，进而扩散至易感的网状内皮组织，病毒大量增殖，再次进入血流形成第2次病毒血症，侵入靶器官。若机体免疫力健全，90%以上感染者表现为隐性感染，如临床上所见的顿挫感染型（流产型）脊髓灰质炎，病人有发热、疲倦、嗜睡、头痛、恶心、呕吐、便秘、咽痛等症状，数天后则可恢复。少数病例脊髓灰质炎病毒沿周围神经轴突蔓延至中枢神经系统，感染某些类型的神经细胞，临床上出现脑膜炎症状，此为无菌性脑膜炎型脊髓灰质炎。病毒在细胞内增殖，损伤或完全破坏细胞，特别是脊髓前角运动神经细胞。严重病例，可累及灰质神经节，甚至后角和背根神经节，患者四肢常出现肌肉驰缓性麻痹，除了神经系统的病理学改变外，尚有心肌炎、淋巴增生等表现。如临床所见的麻痹型脊髓灰质炎（paralytic poliomyelitis）。
脊髓灰质炎病毒的VP1表面蛋白包含几个中和病毒的抗原表位，每个表位都能诱生中和抗体，常在病毒感染后不久产生并可持续多年。sIgA可阻止病毒在口咽部、肠道内的吸附，血清中和抗体（IgM或IgG）可阻止病毒的播散。中和抗体在预防疾病的发生和发展中起着重要作用。
被动输入的抗体，仅起短暂作用，持续期为3～5周。
微生物学检查法
1．病毒分离 取患者感染早期的咽拭子、直肠拭子或粪便标本，经抗生素处理后接种人胚肾、猴肾、Vero等细胞，37℃培养3～6天，若出现细胞病变，应用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型标准血清作中和试验定型。因脑脊液标本难以分离出病毒，一般不采用。
2．血清学检测 用患者急性期和恢复期双份血清作中和试验，若恢复期比急性期抗体高4倍以上或急性期抗体阴性而恢复期阳性则有诊断意义。
3．核酸检测 应用RNA探针进行核酸杂交试验及RT-PCR等方法检测病毒的RNA，并能区分野生株和疫苗株。
防治原则 接种或口服脊髓灰质炎疫苗是预防脊髓灰质炎病毒感染唯一有效的方法。脊髓灰质炎疫苗有两种：灭活脊髓灰质炎疫苗（IPV），又称Salk疫苗；口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV），又称Sabin疫苗。均为三价混合疫苗（TIPV和TOPV）。免疫后均可产生脊髓灰质炎Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型的抗体，获得抗三个型别的免疫力。
灭活脊髓灰质炎疫苗（TIPV）是通过猴肾细胞培养病毒，经福尔马林灭活制成的三价混合疫苗。自1955年在美国等地使用以来，效果良好。其优点是疫苗接种后诱生体液免疫，有效地阻止中枢神经系统免受野病株侵入，减少麻痹率；安全性好，不存在病毒突变和毒力回复的危险性；可与其它疫苗如白喉、百日咳、破伤风疫苗（DDT）联合使用；可用于免疫缺陷或免疫抑制的个体；在使用活疫苗容易失败的热带地区，灭活疫苗尤其有用。缺点是不能产生肠道局部免疫，因此也就不能阻止野生病毒的感染；接种剂量大；次数多，费用高等。目前有些地区仍在使用这种疫苗。
口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（TOPV）是由美国科学家Sabin等人选育出的减毒株制成的。自1962年在世界范围广泛应用以来，取得良好的免疫效果。其优点是类似自然感染，可诱发细胞免疫和体液免疫，特别是可在肠道粘膜产生sIgA，既能降低感染率又能减少麻痹率；免疫力持久，易于实施，费用低等。缺点是病毒有可能突变或回复，发生疫苗相关病例（vaccine-associated case）的危险；不能用于免疫缺陷或免疫抑制患者及其家庭成员。我国现采用三价糖丸活疫苗进行免疫，效果较好，免疫方法见表10-10。
为克服活疫苗突变的危险性，可利用重组DNA技术，将基因组稳定的Ⅰ型疫苗病毒作为编码Ⅱ、Ⅲ型VP1的基因载体，构建一个新的嵌合株（chimeric strain），减少Ⅱ、Ⅲ型病毒在复制过程中的突变，提高活疫苗的安全性。
二、柯萨奇病毒和ECHO病毒
柯萨奇病毒（coxsackievirus）是肠道病毒属的一个亚组，有30个血清型。ECHO病毒又称肠道致细胞病变人孤儿病毒（enteri cytopathogenic human orphan virus），也是肠道病毒属成员，有34个血清型，但其中10、28、34、23等型归为其他病毒属。柯萨奇病毒和ECHO病毒能引起人类多种疾病，从轻型的呼吸道感染到B组病毒引起的心肌炎、心包炎、脑膜脑炎以及严重的婴儿全身性疾病。
生物学性状 柯萨奇病毒的形态结构、理化性状、复制方式、致病性和流行病学等都类似于脊髓灰质炎病毒。新生小鼠是柯萨奇病毒感染的敏感动物，根据病毒对新生小鼠的致病特点分为两个组即A组和B组。A组病毒有1～24个血清型，其中A23归属ECHO9；B组病毒有1～6个血清型。A组病毒感染新生小鼠能引起骨骼肌的广泛肌炎，导致松弛性麻痹；B组病毒则产生灶性肌炎（local myositis），脑炎和较典型的坏死性脂肪炎。有些株在乳鼠和成年鼠中也产生胰腺炎、心肌炎、心内膜炎和肝炎。
B组病毒和A组中的少数型别（7、9、16等）能在猴肾细胞中生长。ECHO病毒也能在人胚肾或猴肾细胞中增殖，产生CPE。
致病性及免疫性 患者和无症状带毒者是传染源。主要传播途径为粪－口途径，潜伏期为2～9天。人在感染早期能从咽部、粪便和血液中分离出病毒，有时能持续5～6周。多数感染者为亚临床感染。柯萨奇B组病毒引起的婴儿感染及病毒性心脏病常能致死。柯萨奇病毒和ECHO病毒引起的疾病见表31-1。
1．无菌性脑膜炎（aseptic meningitis） 由柯萨奇B 组病毒和常见的A7、A9以及ECHO病毒引起。临床早期症状为发热、头痛、全身不适、呕吐和腹痛、轻度麻痹，1～2天后出现颈强直、脑膜刺激症状等。
2．疱疹性咽峡炎（herpangina） 由柯萨奇A组的A2～A6、A8、A10引起。典型症状为发热、咽喉痛、软腭及悬雍垂周围出现水泡性溃疡损伤。
3．手足口病（hand-foot-mouth disease） 由柯萨奇A组的A16、新肠道病毒71引起，有时A5和A10也可引起。特征为口和咽溃疡、手掌和足底的水疱疹，有时可蔓延至臂部和腿部。
4．心肌炎（myocarditis） 成人及儿童的原发性心肌病是由柯萨奇B组病毒引起的，约占心脏病的5％。ECHO病毒1、6、9等型也可引起。新生儿感染常引起死亡，其他年龄感染者可造成明显的心脏损伤，且可出现持续感染，促发导致心肌病的自身免疫应答。
5．婴儿全身性疾病 这是一种非常严重、多器官感染性疾病，包括心脏、肝脏和脑。由柯萨奇B组病毒经胎盘感染胎儿或护理不当造成接触性感染引起。ECHO病毒某些型别也能引起。婴儿感染后常有嗜睡、吸乳困难和呕吐，伴有或不伴有发热等症状，进一步发展为心肌炎或心包炎，甚至死亡。
此外。柯萨奇病毒、ECHO病毒还可引起呼吸道感染，胃肠道疾病，胸肌痛等疾病，可能还与I型糖尿病相关。
人体感染柯萨奇病毒和ECHO病毒后可产生特异性中和抗体，对同型病毒有持久免疫力。
微生物学检查及防治 病毒分离取咽洗液或咽拭子、粪便、结膜拭子等标本，接种原代或传代猴肾细胞，培养5～14天，逐日观察细胞病变，应用标准血清鉴定病毒，或接种乳鼠，A组病毒常在3～8天、B组病毒常在5～14天内出现症状，再根据病理损伤和免疫学方法鉴定。
血清学检查可应用免疫荧光检测细胞中的抗原，或ELISA检测抗体。也可应用RT－PCR法检测其特异性核酸片段。
目前尚无预防和治疗柯萨奇病毒、ECHO病毒感染的疫苗和药物。
三、新肠道病毒
新肠道病毒（new enterovirus）包括68型～71型。该类病毒均能在猴肾细胞上生长。
68型是从患者支气管或肺炎儿童的呼吸道分离到的，提示它与这两种疾病相关。69型是从墨西哥的一个病人分离到的，与人疾病的关系有待研究证实。
70型是急性出血性结膜炎的病原体。1969年～1971年曾在非洲和东南亚爆发流行，后来墨西哥也曾流行。急性出血性结膜炎以突发结膜下出血，从点状至片状出血，覆盖整个球结膜（ballar congunctiva）为特征，临床易诊断。潜伏期为1～2天，病程约为8～10天，传染性强。多见于成人。无有效治疗方法。柯萨奇病毒A24原型的变异株也常引起急性出血性结膜炎。
71型是1969年从美国加利福尼亚一个患脑炎的婴儿粪便中分离到的，后来世界各地相继报道了71型病毒的流行情况。1998年我国台湾省也发生大流行，感染者达数十万人（＞30万）。71型病毒主要引起中枢神经系统疾病，如无菌性脑膜炎、脑炎、脊髓灰质炎样麻痹（poliomyelitis-like paralysis），死亡病例多伴有肺水肿和肺出血。它也可引起手足口病。
第二节 急性胃肠炎病毒
急性胃肠炎是人最常见的一种疾病，据统计，发展中国家每年约有350万学龄前儿童因腹泻而死亡。在生物因素中，除细菌和原虫外，病毒是主要的致病因子。主要包括呼肠病毒科（Reoviridae）的轮状病毒（rotavirus）、杯状病毒科（Caliciviridae）的诺瓦克病毒（Norwalk virus）以及小圆形结构病毒（small round structured virus，SRSV）、腺病毒科（Adenoviridae）F亚属的40型和41型和星状病毒科（Astroviridae）的星状病毒（astrovirus）。
一、轮状病毒
轮状病毒是引起婴幼儿及动物胃肠炎的最重要的病原体。全世界每年有1.3亿婴幼儿患轮状病毒腹泻，死亡87.3万人。1973年Bishop等人首次从患急性腹泻患儿的十二指肠黏膜超薄切片中发现了病毒颗粒，形似车轮，命名为轮状病毒。1983年我国病毒学家洪涛又发现了成人腹泻轮状病毒（adult diarrhea rotavirus）。
生物学性状
1．形态 病毒颗粒呈球形，双衣壳，无包膜。电镜下观察患者粪便标本常有3种类型的病毒颗粒（图31-3）。光滑型颗粒：结构完整，直径为75nm，表面光滑，具有感染性；粗糙型颗粒：病毒颗粒丢失外壳，直径为50nm，暴露出车轮状辐条，不具有感染性；单层颗粒：常缺少基因组RNA，直径为37nm，不具感染性。
图31-3 轮状病毒颗粒
负染电镜照片 X100800
2．基因组及其编码产物 基因组为线形、分节段的双链RNA（dsRNA），含11个片段，大小为18.55kb。
根据基因组RNA在聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）的迁移率，将11个片段分为4组，如A组轮状病毒的基因电泳图形分布从上到下均呈4-2-3-2模式（图31-4）。每一个基因片段含一个开放读码框（ORF），只编码一种病毒特异性蛋白（viral protein，VP）。片段1、2和3分别编码内部核心蛋白VP1、VP2和VP3，在病毒基因组的转录和复制中发挥转录酶和复制酶的作用；片段6编码病毒的主要内衣壳蛋白VP6，为组和亚组特异性抗原；片段4和9分别编码外衣壳蛋白VP4和VP7，其中VP7为中和抗原，决定病毒的血清型，VP4为重要的中和抗原，能增强病毒穿入细胞的能力；基因片段5、7、8、10和11分别编码非结构蛋白（non-structural protein）NSP1、NSP2、NSP3、NSP4和NSP5，在病毒复制中起作用（图31-4）。
图31-4 轮状病毒基因编码的产物及其定位
左为聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）显示的轮状病毒RNA的11个片段；右为轮状病毒结构，
其中VP4和VP7是中和抗原，VP6是亚组特异性抗原。
3．分型 轮状病毒的抗原成分较为复杂。根据组特异性抗原VP6将轮状病毒分为A～G七个组。其中A、B和C组与人腹泻有关，其他组与哺乳动物及脊椎动物腹泻有关。A组轮状病毒根据型特异性抗原VP7分成14个G血清型（VP7为糖蛋白），VP4特异性至少又分为20个P血清型（VP4为蛋白酶敏感蛋白）。
4．培养 轮状病毒体外培养常用非洲绿猴肾细胞（MA-104），标本在接种细胞以前应加胰蛋白酶（10?g/ml）处理，其机制是使VP4裂解成VP5和VP8两个片段，增加病毒穿入细胞的能力。同时在培养液中加入胰酶（0.5?g/ml～1.0?g/ml），逐日观察细胞病变。
致病性和免疫性 A组轮状病毒是世界范围内婴幼儿急性腹泻的最重要的病原体。临床显性感染多见于6个月至2岁儿童。以粪-口途径传播为主。潜伏期为1～4天。温带地区以秋、冬为流行季节。典型症状为腹泻、发热、腹痛、呕吐，最终导致脱水。其致病机制是，人受轮状病毒感染后，病毒在小肠黏膜绒毛细胞的胞浆中增殖，并损伤其转运机制。轮状病毒编码的非结构蛋白（NSP4）作用类似肠毒素，通过诱发信号传导通路诱导分泌，引起腹泻。损伤的细胞脱落至肠腔，释放大量病毒，每克粪便高达1010个病毒颗粒。未经治疗的重病例则因脱水严重，电解质紊乱而导致死亡。
B组轮状病毒是引起成人腹泻的病原体。通过污染的水源经粪-口途径传播。主要感染15～45岁的青壮年。潜伏期为2天左右，病程2.5～6天。临床症状为黄水样腹泻、腹胀、恶心、呕吐，病死率低，常为自限性，可完全恢复。
C组轮状病毒在儿童腹泻中常为散发，偶见暴发流行，发病率低。
文献报道，90%的3岁儿童有抗一种血清型或多种血清型轮状病毒的抗体，这些抗体对同型病毒感染有保护作用。局部免疫因素如分泌型IgA或IFN在抗轮状病毒感染中起重要作用。有时机体虽有抗体存在，但仍能重复感染，这是由不同血清型造成的。
微生物学检查法
1．电子显微镜检查 轮状病毒因其特殊形态以及粪便中含病毒颗粒数量大的特点，用电子显微镜检查，特别是免疫电镜检查实为一种快速可靠的诊断方法。
2．病毒基因组检测 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）是实验室常用于轮状病毒分子流行病学研究的一种方法。可以根据RNA基因组中11个基因片段分布图进行诊断或分辨流行组别。RT-PCR也可用于轮状病毒的诊断。
3．其它方法 临床可应用ELISA商品试剂盒检测轮状病毒的抗原，方法简便、灵敏、快速。
实验室也可应用原代猴肾细胞或传代MA-104细胞分离病毒，但因程序复杂，要求条件较高且费时间，一般很少采用。
防治原则 预防主要是控制传染源，切断传播途径。
儿童受轮状病毒感染后常因腹泻和呕吐造成脱水和电解质紊乱。因此治疗主要是及时补液，纠正酸中毒，以减少死亡率。目前尚无用于临床治疗轮状病毒感染的有效药物。
轮状病毒疫苗的研究大都集中在减毒活疫苗上，已用于临床试验的疫苗有轮状病毒牛株（WC3）、猴株（MMV18006）、猴—人轮状病毒基因重配株、牛—人轮状病毒重配株、轮状病毒新生儿株等，试验证实，这些疫苗都能有效地刺激机体产生抗体，预防感染或减轻再感染的症状。其它还有轮状病毒灭活疫苗、基因工程疫苗等的研究，其免疫效果仍未达到理想要求。
二、杯状病毒及星状病毒
早在70年代，通过电子显微镜在患急性胃肠炎的人和动物的粪便发现了很多病毒，如诺瓦克病毒、小圆形结构病毒（SRSV）、人杯状病毒（human calicivirus，HuCV）以及星状病毒。通过cDNA克隆的核酸序列分析，证实诺瓦克病毒和部分SRSV同属于HuCV。经流行病学调查，人志愿者试验以及实验室研究证实，HuCV、SRSV和星状病毒是引起婴幼儿及成人急性胃肠炎的病原体。
病毒通过污染的食物和水源，经口感染。各年龄组均可发生。HuCV易感染婴儿及学龄儿童，潜伏期为12～72小时；SRSV感染以成人最为多见；星状病毒的潜伏期为3～4天，病程为1～4天，偶尔可持续2周，一般症状较轻。病毒经口进入胃肠道，并在空肠复制。主要临床症状为呕吐、腹泻、发热、腹痛、头痛等。光镜发现空肠活检组织有损伤，小肠近端的绒毛（villi）变宽、变平，淋巴细胞和嗜中性粒细胞增多。电子显微镜显示，上皮细胞仍完整，但微绒毛排列不规则，变短。
星状病毒感染患者的十二指肠活检组织发现，在微绒毛下1/3的上皮细胞中有病毒颗粒存在。急性期患者的粪便中病毒可高达109颗粒/g。
急性胃肠炎可用多种方法进行微生物学诊断。星状病毒能在CaCO3和HT-29细胞上增殖，可用于分离病毒。分离培养人杯状病毒仍未获成功；免疫电镜（IEM）可用于急性胃肠炎患者粪便标本的快速诊断；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）也常用来检测粪便或污染的贝类食物中HuCV；ELISA法可用于检测杯状病毒的抗原或抗体。
这些病毒主要通过污染的水源和食物进入机体，引起急性胃肠炎。注意食品卫生如贝壳类的烹调方法，不生食以及不喝未经处理的生水，可以减少杯状病毒和星状病毒的感染及流行。冷食是SRSV暴发流行的主要传染源，应加强冷食卫生检测和管理。
目前尚无特异的治疗方法，严重脱水患者应住院补液。
三、肠道腺病毒
肠道腺病毒（enteric adenovirus，EAd）是直径为70nm～75nm的20面体立体对称、无包膜的双链DNA病毒。归属于人类腺病毒F亚属，包括40和41血清型。现在已公认它们是引起婴幼儿腹泻的重要病原体之一。其中以41血清型流行最为多见。四季均可发病。临床表现以水泻为主要症状，并伴有发热。病程可持续1～2周。
EAd目前仍不能在常规人组织培养细胞上培养，但能在经腺病毒转化的人胚肾细胞系即G293细胞中复制，或用Chang结膜细胞培养。
EAd引起的急性胃肠炎患者粪便中排毒量大，每克粪便超过1010颗粒，可直接用电镜检测。但电镜下不能区分血清型，可应用限制性核酸内切酶消化病毒的DNA，再通过凝胶电泳，视其DNA片段大小区分40和41血清型。